آزمایشگاه سیگما

دانشگاه تهران

آزمایشگاه سیگما

آزمایشگاه سیگما

محصور کردن سلول های تومور در گردش خون CTCs  توسط روش  دی الکتروفورسیسDEP

روش دی الکتروفورسیس DEP روشی الکتروکینتیکی است که  امکان استفاده از خواص دی الکتریکی ذاتی سلول های معلق را برای تفکیک و جدا سازی آن ها را فراهم می آورد.

این روش یک تکنیک غیر مخرب و مستقل از شناساگر های سطحی است. بنابراین این سلول ها زنده خواهند ماند و امکان کشت آن ها فراهم می شود. این روش بسیار کارآمد تر از روش هایی بر پایه آنتی بادی ها (پادتن ها) خواهد بود.

این گزارش برای هر دو گروه غده شناسان و مهندسان زیستی که علاقه مند به استفاده و آگاهی از خواص CTC ها و روش DEP  هستند مفید خواهد بود. در این گزارش 4 هدف اصلی کنجاده شده است.

 

 

الف) اصول و مبانی DEP

ب) اصول زیستی تفاوت دی الکتریکی بین CTC ها و سلول های خون

ج) پاسخ به دلیل اینکه چرا از همه ی انواع CTC ها برای تشخیص می توان استفاده کرد

د) ابزار هایی که برای آماده سازی 10mL نمونه خون در کمتر از 1 ساعت جهت آنالیز های بالینی روتین مورد نیاز است.

1.مقدمه

خواص سلولی که به عنوان یک بیومارکز (زیست شناساگر) برای سرطان استفاده می شوند، معمولا به دو دسته ی شناساگرهای مولکولی یا مشخصه های فیزیکی سلول دسته بندی می شوند.]مرجع[

معروف ترین شناساگر زیست مولکولی جهت شناسایی و محصور کردن CTC ها از سایر سلول های تک هسته ای خون (PBMN ها) EpCAM است که یک مولکول چسب مانند است که در بیشتر بافت های مخاطی موجود می باشد و روش استفاده از این شناساگر شامل برچسب گذاری با آنتی بادی ها نقش عمده ای برای استفاده از CTC ها جهت تشخیص سرطان سینه و پروستات و ... داشته است.

شناساگر EpCAM و بسیاری دیگر از آنتی ژن ها که به عنوان شناساگر مورد استفاده قرار گرفته اند در همه ی انواع CTC ها مشاهده نشده اند. به علاوه اتصال آنتی بادی ها به آن ها زمان بر و به نوعی کم بازده است و این الحاقات و مرحله ی بعدی احیای سلول ممکن است خواص و زنده بودن CTC ها را تحت تاثیر قرار دهد. به همین دلایل استفاده از خواص فیزیکی CTC ها از اهمیت بالای برخوردار است.

شناساگر های فیزیکی این مزیت را دارا می باشند که نه تنها جهت تفکیک بین سلول های سرطانی و سالم مورد استفاده قرار میگیرند بلکه جهت ایجاد نیرو برای جدایش سلول ها نیز کارآمد هستند.

چون استفاده از آنتی بادی ها و رنگ کردن غیر ضروری میشود ، سلول های جدا شده با این روش دست نخورده و زنده باقی می مانند.

شناساگر های فیزیکی برای شناسایی CTC ها شامل

الف)فیلتر کردن بر اساس اندازه

ب)چگالی(جدایش با استفاده از گرادیان چگالی)

ج) با هر دو (شامل تفکیک به روش اینرسی-هیدودینامیکی)

د) رسانایی یا ظرفیت خازنی (از طریق دیلکتروفورزیس DEP)

می باشد.

هر دو توزیع اندازه و چگالی CTC  ها با ویژگی های سلول های جانبی تک هسته ای خون (PBMN) تداخل دارند که بازده کار را پایین می آورد.

در اینجا در ابتدا تفاوت در خواص دی الکتریکی که برای تفکیک سلول های سالم از سرطانی استفاده می شود مورد بحث قرار میگیرد.

از تقاوت به عنوان تابعی از ساختار غشای سلول ها و همچنین تابعی از ساختار سلول و ارتباط تفاوت منبع تولید آن ها یعنی بافت جامد و خون مستق از نوع سرطان بحث می شود. که نتیجه خواهد شد که این روش برای همه ی اقسام CTC ها که از تومور جامد جدا شده اند موثر خواهد بود.

با توجه به نادر بودن CTC ها در یک نمونه ی 10mL از خون نیاز به انجام پردازش هایی برای حاصل شدن نتیجه معقول وجود دارد.

چون DEP برای سلول ها یک  پدیده ی مایکرو اسکیل(Microscale) است چالش های فنی بسیاری برای رسیدن به یک روش کارآمد برای تحلیل تعداد زیادی CTC  با یک خروجی قابل قبول و زمان معقول مثلا 1 ساعت وجود دارد.

متاسفانه مقالات منتشر شده که از این روش استفاده کرده اند از ناپایداری این روش برای استفاده در ابعاد بالینی گزارش داده اند.

مشکلات اساسی را میتوان به صورت زیر بیان کرد.

جهت رسیدن به یک خروجی بالا و دقیق توسط DEP باید غلظت CTC ها کم باشد.

همچنین خواص سلول طی زمان از طریق نشتی یونی تغییر می کند که منجر به کاهش حساسیت نسبت به میدان الکتریکی اعمالی می شود.

2. اصول دی الکتروفورتیک در جدایش سلول های سرطانی از سلول های سالم

1.2 دی لکتروفورزیس

دی اکتروفورزیس به معنی حرکت ذره ناشی از جابجایی غیر متقارن میدا الکتریکی است. وقتی که یک میدان الکتریکی متغیر به سوسپانسیونی از سلول های زنده وارد می شود، بار های سطحی از یون های محیط بر روی غشای سلول تجمع می کنند و خطوط میدان را دفع می کنند تا جریانی از یون در همه ی اطراف سلول پخش شود.(شکل 1 A,B)

زمان مورد نیاز برای یون ها جهت تجمع بر روی غشای سلول وابسته به تراکم یون ها در محیط اطراف(مثلا رسانایی محیط) و مساحت غشای سلول دارد. اگر میدان ایستا نباشد ولی با فرکانس پایینی نوسان کند، شارژ شدن غشا بر اساس عکس میدان خواهد بود.

دافعه ی خطوط میدان در اطراف سلول ها باعث ایجاد یک سطح انرژی بالاتر نسبت به حالتی که سلولی در محلول نیست می شود.

اگر میدان همگن باشد آنگاه انحراف خطوط میدان در اطراف متقارن و در نتیجه اغتشاش انرژی الکتریکی نیز متقارن خواهد بود . مجموع انرژی سیستم تغییر می کند اما تقارن آن باعث می شود که هیچ نیروی خالصی وارد نشود.(شکل 1A)

با این حال اگر میدان نا همگن باشد، آنگاه انحراف خطوط میدان و اغتشاش ناشی از آن نامتقارن خواهد بود.

مجموع انرژی سیستم به صورت تابعی از مکان سلول و نیروی خالص که همان نیروی اکتروفورتیک است افزایش می یابد.(شکل 1B) هنگامی که خطوط میدان از اطراف سلول می گذند، نیروی DEP در جهت خارج کردن سلول از ناحیه میدان بیشتر عمل می کند.(شکل 1B)

شکل 1

انحراف خطوط میدان (خط های خاکستری) شروع شده از اکترود ها (نوار های سیاه) با سلول های پستاندارن.(A) در میدان الکتریکی با فرکانس پایین، یک غشای سلولی کامل بارها را جمع می کند و در نتیجه میدان های الکتریکی در اطراف را دفع می کند. اگر میدان همگن باشد آنگاه اغتشاش میدان در بالا و پایین سلول متقارن خواهد بود  هیچ نیروی خالصی به سلول وارد نمی شود.;(B) اگر سیستم الکترودی یک میدان الکتریکی غیر همگن ایجاد کند، آنگاه جابجایی میدان در بالا و پایین غیر متقارن خواهد بود. که منجر به ایجاد یک گرادیان انرژی در فضا می شود و یک نیروی دی الکتروفورتیک (DEP) که سلول ها را از مناطق به چگالی میدان بالاتر به مناطق با چگالی میدان پایین تر هل میدهد.;(C) اگر غشای سلول نشتی داسته باشد و مقاومتی نسبت به میدان نشان ندهد، یا اینکه میدان اعمالی در فرکانس تقاطع سلول باشد، و یا اینکه فرکانس میدان بسیار بالا باشد و رسانایی داخلی سلول با محیط معلق هم خوانی داشته باشد، آنگاه خطوط میدان اغنشاش نمی یابند و سلول هیچ FDEPی حتی در میدان غیر همگن تجربه نمی کند.;(D) در فرکانس های بالا، خطوط میدان به سمت داخل سلول منحرف می شوند اگر رسانایی الکتریکی سلول بیشتر از محیط باشد. در این حالت  گرادیان انرژی حاصل FDEPایجاد میکند که سلول را به سمت مناطق با میدان شدید می کشد.

اگر فرکانس میدان افزایش یابد، یون های موجود در محیط زمان کافی برای شارژ کردن سلول در هر نیمه ی تناوب معکوس را نخواهند داشت.بنابراین انحراف میدان ناشی از بارها از مقدار بیشینه کمتر خواهد بود. در فرکانس های فوق العاده بالا ، به طور کلی هیچ زمانی برای شارژ شدن وجود ندارد. اگر شرایط رسانش در درون و بیرون سلول یکسان باشند آنگاه میدان ها مستقیما از میان سلول عبور میکنند.(شکل 1C) در این فرکانس ها امکان تشخیص سلول از محیط به دلیل فرکانس بالا و عدم تداخل در خطوط میدان وجود ندارد. بنابراین نیروی DEP  خالص صفر خواهد بود.

در نهایت، اگر محیط معلق رسانایی پایینی دارد و درون سلول رسانایی بالایی داشته باشد، یون های درون سلول زمان کافی برای شارژ کردد سلول را دارند حتی در صورتی که یون های خارجی این زمان را نداشته باشند. در این شرایط خطوط میدان به سمت داخل سلول متمرکز می شوند و میدان در درون سلول متمرکز تر از خارج آن خواهد بود.(شکل 1D) اختلالی که در آن خطوط میدان متمرکز می شوند نه دفع ، منجر به کاهش سطح انرژی نسبت به حالتی که سلولی در میدان وجود ندارد می شود. در یک میدان نا همگن این اختلال منجر به نیروی DEP مثبتی است که باعث حرکت سلول به سمت میدان های شدید تر میشود.

بر خلاف الکتروفورزیس ، DEP وابسته به میزان بار خالص سلول ها نیست و تنها در میدان های الکتریکی نا همگن رخ میدهد. به ویژه، جهت نیروی DEP تنها با جهت میدان الکتریکی مشخص نمی شود بلکه بر اساس گرادیان میدان نامتقارن خواهد بود.

این ویژگی امکان تفکیک سلول ها بر اساس فرکانس-دی الکتریکی هر سلول را میسر می سازد که مستقل از بار خالص سطحی آن ها خواهد بود.

در یک محیط با رسانایی نسبی پایین تحت تاثیر میدان با فرکانس پایین سلول دفع و با فرکانس بالاتر سلول جذب می شود که  در این میان یک بازه وجود دارد که سلول حرکت نمی کند که به آن فرکانس متقاطع DEP (DEP crossover frequency)گفته می شود.

سلول های مختلف با مساحت سطح متفاوت و ویژگی های اندازه ی آن ها ، فرکانس های   DEPمتفاوتی دارند که می توان با قرار دادن فرکانس میان فرکانس متقاطع آن ها شرایط جدایش سلول ها را فراهم آورد.

در این حالت سلول ها با فرکانس متقاطع پایین تر جذب و با فرکانس متقاطع بالاتر دفع می شود.

 2. 2خواص دی الکتریکی غشای سلول

پوهل برای اولین بار امکان کنترل کردن و جابجایی سلول ها توسط DEP معرفی کرد که منجر به شناخت خواص دی الکتریکی سلول ها ی مختلف و جدا کردن سلول ها در یک محلول شد. با این روش به راحتی امکان تفکیک بین سلول ها ی زنده و مرده میسر می شود. و امکان مشاهده پاسخ سلول ها به تحریک های مانند سمی، ویروسی ، انگلی ، مسری و تفکیک سلول ها، میتوژنیک و PCD  ها فراهم شد. به طور کلی روش های الکتروکنتیکی به عنوان ابزاری دقیق و کارامد برای تحلیل خواص فیزیکی سلول ها شناخته شده است.

در مجموع، این تحقیقان نشان داد که DEP و ROT می توانند با حساسیت بالایی نسبت به تغییرات در مساحت غشا یا رسانایی غشا که ناشی از تحریک ها ، چالش ها و تغییرات فیزیکی است عمل کنند.

در تحقیقات مربوط به سرطان، تفاوت خواص دی الکتریکی ماندگار بین سلول هایی که ساختار زیستی آن ها نرمال و یا حالت های تغییر یافته تحت عوامل فیزیک بر پایه ی شیمیایی و عامل ها مشاهده شده است.

اساس فرکانس تقاطع سلول ها ریخت شناسی غشای سلول است. غشای پلاسمای اکثر سلول ها هموار نیست بلکه شامل اشکال کوچک و بزرگ مانند میکروویلی ها ، چین ها و موج هاستکه منجر می شود سلول های پستاندارن سطح بزرگتری از حالت ایده آل یعنی کره ی هموار با حجم یکسان داشته باشند.

برای تعریف کمی این تفاوت ها از ضریب چین خوردگی Φ استفاده می شود که برابر نسبت مساحت واقعی سلول به مساحت سلول ایده آل با حجم یکسان است.

خواص دی الکتریکی سلول های پستانداران را می توان از نظریه مدل تک پوسته(Single shell model) استخراج کرد. (شکل 2) برای تقریب زدن خواص الکتریکی برای یک سلول با ساختار مشخص، نیازی به هم خوانی کامل ریخت شناسی سلول با حالت ایده آل ارائه شده در شکل 2 جهت رسیدن به یک تقریب منطقی برای خواص دی الکتریکی سلول وجود ندارد.

خواص DEP در مجموع برای یک سلول معلق از انتگرال بر روی حجم اغتشاش در توزیع میدان در اطراف سلول استخراج می شود که شامل حجم بسیار بزرگتری از یک سلول تنها است.(شکل 1) با اینکه مجموع اغتشاش میدان وابسته به مجموع طرفیت باری غشای پلاسمای سلول است(که متناسب با مساحت غشاست) ، نقص های ریخت شناسی در سطح سلول نقش جزئی و کوچکی در شکل دادن به مجموع اغتشاشات میدان و در نتیجه خواص دی الکتریک و DEP ایفا می کند. حتی خواص دی الکتریکی شلول های به نسبت غیر معمولی مانند آن چه در شکل 4F نشان داده شده است به طرز عجیبی توسط مدل کره ی تک پوسته به همراه ضریب چین خوردگی توضیح داده می شود.

شکل 2، پاسخ های DEP سلول های پستاندارن را می توان بر پایه مدل دیالکتریکی پوسته درک کرد.

در (A) سلول به عنوان یک هسته ی همگن معرفی شده است (سیتوپلاسم) که با یک غشای نازک و همگن احاطه شده است (غشای دو جداره ی چربی لیپیدی). این مدل یک سلول کاملا هموار را توجیه میکند که نشان داده شده است در (B);  در واقعیت، سلول های پستاندارن اشکال ریخت شناسی سطحی دارند مانند آنچه در (D) نشان داده شده است که با غشای دوجداره ی چربی لیپیدی پوشانده شده است و منجر به افزایش مساحت سطح سلول در مقایسه با سلول هموار ایده آل می شود.;(C) این اشکال ریخت شناسی را می توان با معرفی ضریب چین خوردگی (Φ) در محاسبات لحاظ کرد تا مساحت غشای چربی لیپیدی واقعی به آنچه شبیه سازی شده است در نظر گرفته شود. نشانه ها:ε وσ به ترتیب به نفوذ پذیری الکتریکی واقعی و رسانایی اتلاق می شود. همچنین اجزای سلول که با زیروند های S ، mem و in ، مشخص شده اند به ترتیب به معنی محیط معلق ، غشای پلاسما و درون سلول ارجا داده می شوند. همچنین Φ ضریب چین خوردگی غشا است.(به متن رجوع شود)

روابط بین اندازه ی سلول، ضریب چین خوردگی غشا و فرکانس تقاطع DEP در ضمیمه استخراج شده اند.  برای سلول هایی که غشایی سالم دارند و در محیطی با رسانش بسیار کمتر از سیتوپلاسم خود قرار گرفته اند ، فرکانس تقاطع DEP متناسب با حاصل ضرب شعاع سلول R، در ضریب چین خوردگی غشا Φ و ظرفیت بر واحد سطح از غشای هموار C0خواهد بود. در واقع، (R.Φ) نشان دهنده ی "خاصیت دی الکتریکی" برای سلول مفروض  است و نشان میدهد که چگونه به اعمال DEP واکنش نشان میدهد. این وابستگی حساس خواص دی الکتریکی به چین خوردگی غشا، به علاوه ی اندازه ی سلول، روش DEP را برای محصور کردن سلول مبتنی بر تنها اندازه، مانند فیلتر کردن ها  یکتا می کند.

3.2 خواص دی الکتریکی سلول های سرطانی ، ریخت شناسی بافت و پیشرفت سرطان

در طول سال ها گونه های زیادی از سلول های سرطانی از هر دو نوع کشت داده شده و گرفته شده از منبع بررسی شده اند و روند ها نشان داده اند که سلول های سرطانی ضریب چین خوردگی و شعاع بزرگتری از هر دو نوع سلول های سالم از همان منبع و یا سلول های خونی دارند.

در حال حاضر در مقاله ای از پیتر گسکوین که درباره ی خواص DEP یک پنل گونه های مختلف سرطان NCI-60 است نشان داده شده است که که همه ی خطوط سلولی مشتق از تومور های جامد، فرکانس تقاطعی دارند که بایستی اجازه ی محصور کردن آن ها از سلول های عادی را با بازده بالا بدهد. خلاصه ای تصویری از این نتایج برای سلول ها از منابع متفاوت در شکل 3 نشان داده شده است.

شکل 3

پاسخ های DEP سلول های سرطانی و خون نرمال که به صورت معکوس خواص دی الکتریکی  نشان داده شده است.، که متناسب با فرکانس تقاطع DEP است و رفتار سلول ها در ناوبری و محصور کردن با روش DEP را مشخص می کند. هر خط  توزیع فرکانس های DEP در بین سلول های یک نوع را نشان میدهد. انواع سلول ها بر اساس عضوی که منبع آن هاست دسته بندی شده اند. نتایج نشان می دهد که تفاوت محسوسی بین خواص DEP سلول های خونی و سلول های تومور جامد و سلول های سرطان خون (Leukemia) وجود دارد.اطلاعات دقیق تر شامل توضیحات بیشتر و نحوه ی اندازه کیریها در مرجعی دیگر به چاپ رسیده است.

سلول ها با خواص زیستی تغییر کرده گرایش به نشان دادن تعداد بیشتری اشکال سطحی دارند، معمولا 50% تا 300% ظرفیت بر واحد سطح بزرگتری نسبت به سلول ها ی نرمال دارند. مساحت غشا تاثیر بسیار مهم تری از سایر عوامل تغییر دهنده ظرفیت سلول مانند تغییرات در بافت پروتئین/چربی لیپیدی در غشا و یا ضخامت غشا دارد.

به علاوه ی داشتن ضریب چین خوردگی Φ بزرگتر از سلول های نرمال، سلول های سرطانی شعاع R بزرگتری از همتایان خود دارند; هر دو عامل باعث ایجاد تفاوت درخواص دی الکتریکی (R.Φ)بین سلول های تغییر یافته و سلول های نرمال می شوند.

با ترکیب ضریب چین خوردگی و اندازه مشاهده شد که خطوط سرطان خون (Leukemia) نیز از سلول های نرمال خون متفاوت است اما تفاوت ها کوچکتر از نوع تومور های جامد است. این تفاوت ها بین سرطان خون و سلول های خون امکان جدایش سلول ها با روش DEP اما با بازدهی پایین تر از آنچه برای سلول های تومور جامد پیش بینی می شود فراهم گردد.

با وجود این اکتشافات تجربی ، بدون دانستن زمینه های بیولوژیکی تفاوت ها بین سلول های سرطانی و سلول های خونی این سوال مطرح می شود که تا چه حد DEP می تواند در محصور کردن CTC ها فازغ از مبداشان از خون مفید باشد. برای پاسخ دقیق به این سوال، دکتر گسکوین و همکارانش 40 نوع سلول پیش کشت داده شده آماده شد و سپس در محلول معلق آزاد شد. مشاهده شد که خواص غشای سلول های رها شده در محلول وابسته به ریخت شناسی در محل رشد آن ها قبل از به محصول رسیدن دارد. وقتی سلول جزئی کوچک از یک بافت مجمتع است، مساحت سطح و حجم خود را تغییر می دهد تا با سلول های همسایه همخوانی پیدا کند. با این حال زمانی که قید لنگری سلول از بین میرود و سلول در محلول معلق آزاد می شود، تنش های ساختار سیتوپلاسم (cytoskeletal) باعث کروی شدن آن مانند یه کره ی کاذب می شود(Pseudo-spherical). تا زمانی که سلول سالم باقی می ماند، حجم سیتوپلاسمی و مساحت غشای سلول هر دو ثابت باقی می مانند. بنابراین مساحت غشا، که برای همخوانی با سلول های اطراف در بافت به اندازه ی کافی بزرگ بود، به صورت پرده ای چین خورده و دور سلول کاذب قرار میگیرد. هر نوع فیلوپدیا(میله های میکرونی) و میکروویلی که در فاصله ی خالی بین سلول ها در بافت مرجع وجود داشت باعث افزایش در مساحت نهایی سطح می شود.

شکل 3، که مدل دی الکتریکی تک پوسته را نشان میدهد و به طور عمده برای تحلیل خواص دی الکتریکی سلول های پستانداران مورد استفاده قرار میگیرد، بهبود یافته تا این چین خوردگی ها را که در حین تموج ایجاد می شوند را لحاظ کند. در عمل، این مدل برای توضیح CTC هایی که کاملا کروی نیستند و آن هایی که بسیار بیشتر از آنچه نشان داده شد چین خورده اند کافی است. روابط کامل در ضمیمه آمده است. به طور عمده، تحلیل ها نشان میدهد که خواص دی الکتریکی برای سلول در سوسپانسیون را می توان به صورت ضمنی از مشخصه های ریخت شناسی در بافت مرجع برداشت کرد.

به ویژه، فرکانس تقاطع DEP زمانی که سلول وارد سوسپانسون می شود انتظار میرود که متناسب باشد با  ، که V حجم سلول است و A مساحت کلی سطح در محل مبدا است فارغ از شکلی که در بافت جامد دارد. به طور کلی ، V  و A را میتوان با مشاهده و بررسی بافت تخمین زد. این رابطه برای اولین بار به عنوان وسیله ای برای تبدیل مشاهدات ریخت شناسی صورت گرفته توسط پاتولوژیست به خصیصه های DEP آن سلول ها هنگامی که در سوسپانسیون به عنوان CTC قرار میگیرند استفاده شود.

در حالی که سلول ها در سوسپانسیون در صورتی که کره ای کاملا هموار باشند کمینه مساحت سطح را دارند، سلول های بافت نیز کمینه ی مساحت ممکن را به خود میگیرند پس در حین تشکیل ساختار شبکه ی  3-بعدی به شکل آجر مانند در می آیند.(نگاه کنید به شکل 4). در این حالت، تخمین صورت گرفته که برای ساختاری کاملا منظم از لایه های مخاطی است، سلول ها مساحت غشایی دارند که از سلول های کروی با حجم یکسان با ضریب  بزرگتر است. این میزان، کمترین میزان ضریب چین خوردگی ممکن برای ساختار منظم در بافت است. سلول های که هموار نیستند و از بافت هایی کمتر منظم خارج شده اند ضریب چین خوردگی بیشتر از 1.24 خواهند داشت. در عمل طبق اندازه گیری های  DEP و ROT که بر روی سلول های به دست آمده از بافت انجام شده بود این نتیجه به دست آمده است که ضریب چین خوردگی بیشتر است حتی بیشتر از 10. برای مثال تزریق وریدی با محلول هیدرولیز کننده بر روی موش های آزمایشگاهی از طریق سیاهرگ ارتباطی با کبد نتایجی با ضریب چین خوردگی بین 4 تا 10.5 و اندازه هایی بین 15-40 µm را نشان داد.

شکل 4  نمایش دو یعدی ابعاد ریخت شناسی CTC های مشتق از بافت جامد

  1. حداقل مساحت سطحی که یک سلول در بافت جامد می تواند داشته باشد و در ساختار یکپارچه ی آجری رخ میدهد. در این نظم، مساحت سطح سلول ها با ضریب  بیشتر کره ی هم حجم ایده آل می شود.;  (B) سلول های تومور با افزایش درجه سرطان بی نظم تر می شوند، که منجر به افزایش مساحت سطح سلول ها می شود.;(C) وقتی که سلول های تومور وارد چرخه می شوند و کروی تر می شوند ، سطح آن ها چین می خورد تا مساحت سطح هم خوانی پیدا کند.(D) که باعث داشتن فرکانس تقاطع DEP پایین می شود.;(E) سلول های سرطانی به صورت کیسه های بزرگی در می آیند زمانی که در سوسپانسیون مقاومت می کنند با این حال ضریب چین خوردگی همچنان بزرگ باقی می ماند.;(F) سلول های MDA-MB-231  در سوسپانسون بلافاصله پس از وارد شدن از حالت تومور جامد که چین خوردگی و غشای اضافی در آن ها مشهود است.;(G) همان سلول بعد از ماندن در محلول برای 2 ساعت. با وجود از دست دادن کیسه ها که حجم زیادی از سیتوپلاسم و غشا را نیز برده است همچنان ضریب چین خوردگی بزرگتری از سلول های خون دارد.

برای درک اینکه چرا سلول های سرطانی غشای بزرگتری از سلول های نرمال دارند ، باید دانست که سرطان یک پدیده ی بی نظم(entropic) در تمام سطوح زندگی است. با پیشرفت آن به صورت ژنی ، کروموزومی ، هسته ای و ساختار داخلی سلول و توده ی سلولی و بافت، ریخت شناسی آن به همین ترتیب بی نظم تر می شود تا زمانی که در مراحل پایانی، سلول های تومور به بافت همسایه حمله می کنند و شروع به حرکت در امتداد بدن به عنوان CTC می کنند که تومور را پخش میکند و کیفیت ساختار های توده ارگانیزمی را نیز کاهش می دهد . اندازه گیریهای اولیه به پاتولوژیست ها کمک می کند تا به صورت کمی میزان پیشرفت سرطان را با سطح تومور تشخیص دهند، که به وسیله ی میزان تغییرات ریخت شناسی سلول و شکست های ساختار منظم بافت در مقایسه با خالت طبیعیو به خوبی تفکیک شده تعریف می شود. با پیشرفت سرطان و افرایش سطح تومور، سطح سلول برای هم خوانی با ساختار نامنظم اطراف افزایش می یابد. تشدید شده این اثر ، کاهش شدید  درجه پیچیدگی های هم خوانی درون سلولی است،که شامل اتصالات هم خوان ، اتصالات محکم، حالات کانکسی و اتصالات فواصل خالی است، که معمولا اتصال نزدیکی بین غشاهای سلول های مجاور در بافت نرمال است تا فواصل خالی پوشانده شوند. با کاهش همخوانی بین سلولی حالت هایی از قطعات غشایی مانند میله مانند ها برای خالی کردن فضای خالی بین سلول های همسایه به وجود می آیند. بعضی سلول ها امکان شکاف ایجاد کردن بین سلول ها و خارج شدن به سمت بافت های نرمال را پیدا میکنند. این جنبندگی که با فیلوپدیا ها یا اینودوپدیاها(میله های غشای سلولی) افزایش می یابد امکان عبور از دیواره ی شریان های خونی و تبدیل شدن سلول به CTC  را فراهم می آورد.

به نظر می رسد که افزایش مساحت غشای سلول تنها به عنوان تبعات پیشرفت سرطان مطرح نیست بلکه خود نقش اساسی در عملکرد مخرب و اشتباه سلول ها ی سرطانی وتبدیل شدن آن ها به CTC دارد. طبق این دانش ارائه شده، دیده شده که افزایش مساحت غشای سلول های سرطانی یک خصیصه ی فیزیکی است که سطح سرطان را نشان میدهد.

مرجع :

1. Isolation of Circulating Tumor Cells by Dielectrophoresis

خواندن 308013 دفعه آخرین ویرایش در چهارشنبه, 25 شهریور 1394 ساعت 14:26

765444 نظرها

  • پیوند نظر Vincenzo جمعه, 03 آذر 1396 ساعت 05:41 ارسال شده توسط Vincenzo

    I'd like to pay this cheque in, please http://www.militaryrealtynetwork.com/index.php/where-can-i-get-viagra-in-kuwait-44e2.pdf viagra online bestellen ohne rezept auf rechnung In his most outspoken comments on the issue since his appointment earlier this year, the Archbishop said that volunteers refusing checks are being told: “You can’t come to church”.
    https://www.gospelgeral.com.br/index.php/herbal-viagra-uk-reviews-145#displeased buy single viagra tablet
    Much more research on "possible solutions" is still needed, Robinson said. "But studies like this one demonstrate that the science is progressing and can help us design programs to help slow and hopefully reverse the obesity epidemic."
    https://www.superluigibros.com/can-you-buy-cipro-over-the-counter-5ada.pdf para que sirve cipro xr 1g In meetings with small groups of rank-and-file lawmakers, House Speaker John A. Boehner (R-Ohio) has emphasized that he will not permit the country to default for the first time on its debt. Given that a bloc of hard-line conservatives is unlikely to vote to increase the limit under any circumstances, Boehner has told fellow Republicans that they must craft an agreement that can attract significant Democratic support.
    http://www.calibrecontrol.com/viagra-cialis-precio.pdf#grotesque cialis kupiti beograd Outrage erupted on Twitter and other social media sites lastyear after consumers found out that everything from U.S. schoollunches to fast-food hamburgers used so called "lean finelytextured beef," a low-fat product made from chunks of beef,including trimmings, and exposed to tiny bursts of ammoniumhydroxide to kill E. coli and other dangerous contaminants. Theresulting media storm over what critics dubbed "pink slime"nearly destroyed the product's maker, even though U.S. foodsafety regulators said it was safe.
    http://themalthouseironbridge.co.uk/discreet-viagra-online-uk-62c discreet viagra online uk Most striking of all is what Laura Ellen Bacon has woven from sweet-smelling Musgrove Willow, harvested from the Levels at Westonzoyland and patiently knotted together by hand. Bacon’s thicket of intricately curlicued tracery fills the whole of Barrington’s Old Kitchen, evoking the fairy-tale forest that magically surrounds the Sleeping Beauty or some primitive form of life mushrooming under a microscope like a virus without head or tail.

  • پیوند نظر Malik جمعه, 03 آذر 1396 ساعت 05:41 ارسال شده توسط Malik

    Very interesting tale http://www.hoteldaina.lv/dulcolax-dosage-a40 dulcolax online tablets Of the 54 Nikkei companies that have reported quarterlyearnings so far, two-thirds either beat or met marketexpectations, according to Thomson Reuters StarMine, versus 54percent in the previous quarter.
    http://southasianlife.com/is-dapoxetine-available-in-usa-c12b.pdf#soup dapoxetine composition As Jeff Kim, president of CDNetworks, a content-delivery network, said in USA Today, the application may be so “fundamentally flawed” that they should essentially start over, but don’t have time. “If I was them, and I’m just conjecturing, I would probably come up with some manual way of saying, ‘Only people with the last name starting with A can sign up today.”
    http://www.kayserimeydan.com.tr/cephalexin-500mg-capsule-en-espaly-6e0#acknowledge cephalexin 250mg capsules side effects In May 2012, the United States suspended Argentina from theU.S. Generalized System of Preferences program, which waivesimport duties on certain goods from developing countries, afterthe South American nation failed to pay about $300 million incompensation awards in disputes involving Azurix and Blue RidgeInvestments. It was the first time a country had been suspendedfrom the program for failing to pay an arbitration award.
    http://www.peterlonard.com/index.php/how-much-does-ibuprofen-800-mg-cost-67d4.pdf how much does ibuprofen 800 mg cost "The (CPA) proposal is an excellent opportunity to expand our Australian core office portfolio and is in line with our strategy to invest in high-quality assets that are well position in their markets," Graeme Eadie, senior vice-president and head of real estate investments at CPPIB, said in a statement.
    https://www.andmetics.com/fertility-juice-blend-10d#justice fertility blend loose stool And yet, in the many conversations with child and pneumonia health experts, doctors, and researchers I had before I left for Lusaka, it became clear to me that pneumonia is not just the top cause of death among young children. It is also one of the most overlooked. 

  • پیوند نظر Kendall جمعه, 03 آذر 1396 ساعت 05:41 ارسال شده توسط Kendall

    My battery's about to run out http://www.for-darmstadt.de/aciclovir-mylan-achat-838 aciclovir pomada comprar online One of the most critically-acclaimed and groundbreaking shows of the past decade concludes in this 'Lost' Series Finale Event. The battle lines are drawn as Locke puts his plan into action, which could finally liberate him from the island, on 'Lost,' SUNDAY, MAY 23 (9:00-11:30 p.m., ET) on the ABC Television Network.
    http://www.westernworldsaddlery.com/blog/antirretrovirales-precio-colombia-6dac.pdf antirretrovirales precio colombia The "Catch My Breath" singer wed her talent manager husband in an intimate ceremony only attended by a few close friends and family, including Blackstock's two children from a previous marriage.
    http://roach-shop.pl/mandelay-climax-control-gel-side-effects.pdf#message delay spray for man uae Simon Schorno, a spokesman for the ICRC in Damascus, said the abduction took place near the town of Saraqeb in Idlib province around 11:30 a.m. local time (0830 GMT) as they team was returning to Damascus. Six of the people kidnapped are ICRC staff workers and one is a volunteer from the Syrian Red Crescent, he said.
    http://www.militaryrealtynetwork.com/index.php/generic-rogaine-walgreens-44e2.pdf#guarantee does rogaine make you grow facial hair "I've done it all different ways, that's the thing," said the 37-year-old American. "Some years I've striped it and have really played well, and other years I've hit it all over the lot and had to be creative.
    http://skrabac.com/nimodipine-prix.pdf#login nimodipine prix
    Several of Jos A. Bank's top four shareholders, includingFidelity, Royce & Associates and Wellington Management, are alsotop 30 shareholders in Men's Wearhouse, according to ThomsonReuters data as of June 30.

  • پیوند نظر Cletus جمعه, 03 آذر 1396 ساعت 05:41 ارسال شده توسط Cletus

    I'm a housewife http://thegoodhealthsuite.co.uk/GP/flonase-nasal-spray-buy-5ca fluticasone propionate nasal spray brand names
    "On the one hand, you have the fact that the majority supposedly support these initiatives. And on the other you have the authorities, like Mizulina, who instead of making this majority more tolerant, are tossing logs on the fire," Alexeyev said. "They'll end up burning all of us."
    http://themalthouseironbridge.co.uk/viarex-enhancement-119 viarex application The wicketkeeping duties will be performed either by Jonny Bairstow or Jos Buttler. James Harris, the Welshman who has moved from Glamorgan to Middlesex in the close season, was added to the ODI squad, along with Woakes, after his persuasive form during the Performance Programme tour in India late last year.
    http://www.westnewcastleacademy.org/cialis-chewable-tablets-9ece.pdf#brisk cheap cialis 200mg iTunes Radio launched in the United States on 18 September 2013 – the same day as Apple iOS 7. It is available across devices, including being integrated into the Music app on portable iOS devices and Apple TV as well as iTunes on OS X and Windows.
    http://www.ept-verkosto.fi/prix-moyen-dulcolax.pdf resep dulcolax "Unprecedented levels" of growth in the fee-based businessof administering benefits for corporations and internationalgrowth of the benefits administration business contributed tohigher operating costs, it said.
    http://rollstud.com/accutane-20mg-a-day-reviews.pdf buy real accutane online
    "This is like the follow-through of the story," CNNspokeswoman Bridget Leininger said of the network's wall-to-wallcoverage. "So you see everyone covering this trial with all theundertones and the judicial system."

  • پیوند نظر Kidrock جمعه, 03 آذر 1396 ساعت 05:41 ارسال شده توسط Kidrock

    i'm fine good work http://www.militaryrealtynetwork.com/index.php/where-can-i-get-viagra-in-kuwait-44e2.pdf compra de viagra on line en argentina China's Insurance Regulatory Commission said Ping An'sinclusion was a recognition of its importance in theinternational insurance market, adding it would strengthen itsoversight of the insurer whose solvency ratio was well above theregulatory requirement.
    http://www.kayserimeydan.com.tr/clomid-50-mg-2-comprims-par-jour-6e0#documentation clomid dosage 50 mg InformationWeek encourages readers to engage in spirited, healthy debate, including taking us to task. However, InformationWeek moderates all comments posted to our site, and reserves the right to modify or remove any content that it determines to be derogatory, offensive, inflammatory, vulgar, irrelevant/off-topic, racist or obvious marketing/SPAM. InformationWeek further reserves the right to disable the profile of any commenter participating in said activities.
    https://topastuces.net/where-can-i-buy-synthroid-online-038#spirit synthroid buy online uk Whilst it must be acknowledged that rental prices are the highest in the country, and students should be prepared for this even with the extra loan on offer, if you do your homework, then that is where the extra costs end.
    https://www.gospelgeral.com.br/index.php/atorvastatin-20-mg-walmart-96d#appalling atorvastatin 20 mg uses The ultrabooks' chassis are made from aluminium with a magnesium lid base for strength and durability - they've passed drop-tests from a height of 60cm as well being splash-proof to ward against unfortunate coffee spillage related incidents.
    http://roach-shop.pl/mandelay-climax-control-gel-side-effects.pdf#wind mandelay climax control gel side effects Central bankers in several advanced economies have opened aspace for their governments to implement fiscal, financial andregulatory reforms that should be seized, Carstens told centralbankers from Europe, the Americas and Asia gathered at a forumin Mexico City on Monday.

  • پیوند نظر Teddy جمعه, 03 آذر 1396 ساعت 05:41 ارسال شده توسط Teddy

    Where are you from? http://www.theltforum.co.uk/super-filagra-bestellen-1737.pdf#use efectos secundarios de la filagra
    The Advertising Standards Authority (ASA) confirmed they launched their investigation after receiving 60 complaints expressing concerns that the ads were "reminiscent of slogans used by racist groups to attack immigrants in the past".
    http://www.burtonartgallery.co.uk/how-many-hydroxyzine-50-mg-to-get-high-3f1#setting que es hydroxyzine hcl 50 mg She said that while the funding for the benefits was comingfrom Peabody, the responsibility to pay remained with Heritage,and that Patriot's request to abandon that responsibility couldnot be parsed out to include some retiree groups and not others.
    http://www.jklhoivapalvelu.com/buy-wellbutrin-sr-in-canada-eba#gale buy wellbutrin xl online no prescription It cited a "common understanding" between Brazil and the European Union on data privacy, and said "negotiations are underway in South America for the deployment of land connections between all nations." It said Brazil plans to boost investment in home-grown technology and buy only software and hardware that meet government data privacy specifications.
    http://skrabac.com/acai-berry-900-online-kaufen.pdf#etc acai berry zlava It was fun, she said. I mean Im just trying not to laugh the whole time because he just makes me and everyone laugh so hard but  it was great, hes just so good. Watching him is a delight.
    http://www.benchevents.com/olanzapine-benzo-withdrawal.pdf olanzapine benzo withdrawal "What's announced so far generates more doubts and worries," Oliver Azuara, a University of Chicago-trained economist, wrote in a widely cited condemnation of the campaign for Mexico Evalua, a non-partisan think tank. “There are no magic shortcuts or remedies to eradicate poverty. There are risks in going back to openly politicizing this.

  • پیوند نظر Madelyn جمعه, 03 آذر 1396 ساعت 05:41 ارسال شده توسط Madelyn

    Where do you come from? http://www.peterlonard.com/index.php/preis-fr-viagra-in-der-schweiz-67d4.pdf#st resep natural viagra Sarah was dying of cystic fibrosis this time last month. The genetic condition affects cells that produce mucus, sweat and digestive fluid. Patients typically suffer so much lung damage that they often go into respiratory failure, which is why Sarah needed a lung transplant to survive.
    http://staffscc.net/wppalmer/index.php/dilantin-50-mg.pdf#pea what is the purpose of a dilantin level blood test U.S. stock index futures were little changed ahead of dataon retail sales data. S&P 500 futures rose 1.8 points,Dow Jones industrial average futures rose 1 point, andNasdaq 100 futures added 1.75 points.
    http://www.benchevents.com/harga-obat-cytotec-1-tablet.pdf abortion pills cytotec forum In a midnight vote Friday, legislators voted to redefine the military's duty as: "defending the Turkish nation against external threats and dangers, and maintaining and strengthening military powers to ensure deterrence."
    http://www.dailymarkets.info/best-price-for-pfizer-viagra-6df viagra tablets for premature ejaculation
    The 24-year-old beat Austrian Melzer 6-4 3-6 6-4 in the last four clash to set up a final on Sunday against fifth seed Julien Benneteau who upset second seed Stanislas Wawrinka 6-4 6-3 in the other last four clash.
    http://sisailmahuolto.com/zofran-odt-dosage-by-weight.pdf#temptation side effects of ondansetron odt 4 mg "I think we are close to converging on a common, realisticestimate that there will be a small, viable primary budgetsurplus this year," the official said on condition of anonymity,after the first meeting in the latest review of Greece's bailoutby its lenders.

  • پیوند نظر Manuel جمعه, 03 آذر 1396 ساعت 05:41 ارسال شده توسط Manuel

    I'd like to withdraw $100, please http://snowbility.co.uk/generic-tretinoin-gel-0500.pdf#sounds isotretinoin tabletten kaufen The report warns of the risks of storms and coastal floodingto important oil and gas installations, the degrading effects ofheat on the nation's electrical distribution system and howwater scarcity could crimp new drilling technologies.
    http://thegoodhealthsuite.co.uk/GP/alprostadil-in-patent-ductus-arteriosus-e5f alprostadil 20mcg injectabil Mr Clegg called on Labour leader Ed Miliband and shadow chancellor Ed Balls to "apologise for being too busy schmoozing the bankers to worry about the risks they were taking with the economy. Apologise for not balancing the books in the good times. Apologise for abolishing the 10p tax rate."
    http://www.iletours.com/best-time-to-take-l-arginine-for-ed-bd6#size l arginine supplement reviews The lax hospital practices that put a Brooklyn, N.Y., woman into an early grave have been reformed — prompted by the mom’s needless death from lung cancer, according to state and city health officials.
    http://www.iletours.com/chibro-proscar-1mg-a8f#insist finasteride 5mg online uk I spoke with Atli Örvarsson who scored the first installment of the highly-anticipated Mortal Instruments: City of Bones at the red carpet premier in Hollywood about what influenced the musical sound of the film. You'll be able to see and hear the movie when it opens nationwide on August 21, 2013.
    http://www.ept-verkosto.fi/prostate-massager-pros-and-cons.pdf do you use prostate massager That is about a 350 percent increase, researchers for thehealth nonprofit groups said. About 5 percent of children andteenagers are also now severely obese, they added. Rates ofextreme obesity were nearly twice as high for women as for men,and were also particularly high for Hispanic boys and blackgirls.

  • پیوند نظر Danilo جمعه, 03 آذر 1396 ساعت 05:41 ارسال شده توسط Danilo

    Could I have a statement, please? https://www.basicsofsikhi.com/tamoxifen-dosage-mice.pdf tamoxifen sale online Many have said that the questions raised undermine the claims of austerity advocates around the world that deficits should be quickly reduced. Some have gone so far as to blame RR for the unemployment of millions, asserting that they provided crucial intellectual ammunition for austerity policies. Others believe that even after re-analysis the data support the view that deficit and debt burden reduction is important in most of the industrialized world. Still others regard the controversy as calling into question the usefulness of statistical research on economic policy questions.
    http://www.for-darmstadt.de/aciclovir-mylan-achat-838#fry aciclovir tabletki cena
    As Reuters reported Monday, the Special Operations Division of the DEA funnels information from overseas NSA intercepts, domestic wiretaps, informants and a large DEA database of telephone records to authorities nationwide to help them launch criminal investigations of Americans. The DEA phone database is distinct from a NSA database disclosed by former NSA contractor Edward Snowden.
    http://rollstud.com/duloxetine-cost-in-india.pdf cymbalta going generic in 2013 "In many parts of the company the current administrativefunctions still reflect the needs of the former diversifiedgroup," it said, adding that the overhaul would also allow it toreact faster to changing market conditions.
    http://www.iletours.com/where-to-buy-maxoderm-cream-22f where to buy maxoderm cream "We have mandated banks with the aim of doing an IPO of 30pct of EE, but neither owner Deutsche Telekom orourselves are in a rush," said Chief Financial Officer GervaisPellissier at second-quarter results.
    http://www.calibrecontrol.com/viagra-cialis-precio.pdf#wish cialis kopen antwerpen Officials promoted the auction as a key step in its push tocreate an attractive environment for infrastructure spending inthe country, whose economy has struggled over the past threeyears. The government expects $90 billion in annual investmentsthrough 2017 to help Brazil overcome soaring logistics costs andoverheads for farmers and exporters.

  • پیوند نظر Brooklyn جمعه, 03 آذر 1396 ساعت 05:41 ارسال شده توسط Brooklyn

    Do you know what extension he's on? http://thegoodhealthsuite.co.uk/GP/flonase-nasal-spray-buy-5ca#supper price of flonase at target According to Know Your Mobile, rumor has it that the new Sony smartphone will feature full HD resolution at 1920x1080 pixels, and a 5-inch Triluminos panel with Sony's X-Reality Engine which claims to provide richer, but more natural colors. 
    http://www.westernworldsaddlery.com/blog/do-you-get-pregnant-on-clomid-6dac.pdf#section will taking clomid make me have twins David Shaw, the chief constable of West Mercia Police, issued a “profound and unreserved” apology to Mr Mitchell and said he was referring the matter to HM Inspector of Constabulary.
    https://topastuces.net/proxeed-plus-youtube-fe3 proxeed plus price uk U.S. oil production surged again during World War Two. Butfears about peaking oil production resurfaced in the 1950s whenShell research scientist M King Hubbert predicted U.S. oilproduction would peak around 1970.
    http://www.gravityforce.co.uk/precio-cialis-en-chile.pdf dove comprare il cialis online Imagine a fire starting to engulf your neighbor's home, but the fire engine that rushes to the scene has tanks filled with kerosene instead of water. It'd be disastrous. In a few days, the Supreme Court will hear a case that threatens to be just like that fire truck, one that could take a political system already dominated by big money special interests and allow even more influence buying by elite donors.
    http://www.benchevents.com/olanzapine-benzo-withdrawal.pdf#board seroquel vs zyprexa for depression Efforts to reach the media offices of Pimco and Rothschildwere unsuccessful. Pinheiro Neto, which is based in São Paulo,declined to comment. Calls made to lawyers at Cleary's New Yorkoffices were not immediately returned.

نظر دادن

از پر شدن تمامی موارد الزامی ستاره‌دار (*) اطمینان حاصل کنید. کد HTML مجاز نیست.

درباره ما

 گروه پژوهشهای کاربردی MEMS دانشگاه تهران در مهر ماه 1394 با هدف انجام پژوهشهای کاربردی به منظور دستیابی به فنآوری های Hitech در حوزه های MEMS&NEMS که مورد نیاز صنایع مختلف کشور باشد، با تلاش جمعی از اساتید و دانشجویان رشته مهندسی سیستم های میکرو و نانو الکترومکانیکی دانشگاه تهران تاسیس گردید. 

بالا
ما از کوکی ها برای بهبود وب سایت استفاده می کنیم.ادامه استفاده شما از کوکی ها در سایت رضایت شما را از کوکی ها نشان می دهد. مشاهده جزئیات